对于细胞培养而言,胎牛血清(fetal bovine serum, fbs)的重要性不言而喻。尽管近年来无血清培养基和非动物来源的培养基越来越受到关注,但目前大部分细胞还无法适用这些培养基,并且存在费用较高和细胞生长较缓慢的缺点,因此,含有fbs的*培养基仍然是目前主流的细胞培养体系。把细胞养好的三个关键要素是:良好的细胞来源,正确的实验操作,以及合适的培养体系。其中“合适的培养体系”就是要创造适合细胞生长的环境,给细胞建立一个满意的“家”,而fbs就好比于这个家的装修,可以提高细胞的居住环境和舒适性,让细胞更好更快地生长!
当然,fbs并不是完美的,它除了可为细胞提供生长所必须的蛋白、细胞因子、激素和微量元素等多种营养物质,同时也含有内毒素、补体、抗体等对细胞生长有危害的成分,若选择不当,不合适的fbs会严重影响细胞的生长状态甚至导致细胞死亡。因此,fbs既是让细胞快乐成长的*营养物,又是可能导致细胞死亡的“定时弹”!辛苦养起来的细胞可能因为fbs用错而一切归零……
那么,应如何为你的细胞选购fbs呢?选购fbs应考虑哪些标准?
血源可追溯性
选择来源安全、可追溯的fbs对于细胞培养来说至关重要。目前市面上存在较多以假乱真的fbs产品,科研工作者对血清的真实产地、来源难以鉴别。对此,血清行业协会(isia)实施了供应链可追溯性的行业标准,以确保fbs的质量和安全性。例如,fbs供应商是否保留原产地的可追溯记录?是否持有血清生产各阶段处理、运输和商业交易的文件?这些都是判断fbs可追溯性需要考虑的因素。
产品检测
每款fbs在生产上市之前,必须经过严格的质控检测。
质控环节*,以确保上市的血清符合规定合乎规格,而血清产品分析证书(coa)就是fbs质控的重要体现。在coa中,常规的检测指标包括内毒素、总蛋白、细菌、病毒等,例如我国药典规定,fbs中内毒素含量应≤10eu/ml,另外总蛋白为30-50mg/ml、血红蛋白检测不高于30mg/dl。
质量验证
我们使用fbs目的是为了让细胞更真实、健康地生长。在确保了fbs的来源真实性、安全可靠性后,下一步就要对fbs的质量,即培养细胞的效果进行鉴定了,而这也是决定细胞能否养好的关键。
在细胞培养过程,质量粗糙的fbs可能会导致细胞出现生长速度缓慢、不贴壁、容易老化等现象,从而导致实验受阻。经过质量验证的fbs,则可以十分确定这款fbs对哪些细胞具有良好的培养效果,进而判断其能否把自己的细胞养好。对于质量优质的fbs,通常采用血清敏感性细胞(如干细胞)来进行培养验证,若培养效果良好,则其他常规细胞系的培养就更不在话下。
稳定性
fbs作为其他行业的副产品,其生产在本质上会受到天气、食物供应、经济条件和牛群规模及疫情等各种因素的影响,导致血清的供应可能出现货源、价格及批次间的不稳定性,从而造成实验的不顺甚至实验失败。在过去,国内外已有多个实验室出现过因血清批间差异大而导致实验结果无法重复的情况,浪费了巨大的时间和金钱成本。
因此,找到稳定提供同批次fbs的供应商,对于确保自己细胞实验结果的真实性和可重复性具有重要意义,而且花在重复实验或检验新批次上的时间将大大减少。
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